Immunofluorescence / FISH Imaging
免疫荧光 / FISH成像
Immunofluorescence / FISH Imaging
免疫荧光细胞化学是根据抗原抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素制成荧光标记物，
再用这种荧光抗体（或抗原）作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗原（或抗体）荧光原位杂交技术
(Florescence In-Situ Hybridization简称FISH)是通过荧光标记的DNA探针与待测样本的DNA进行原位杂
交，
在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数，从而对染色体或基因异常的细胞、组织样本
进行检测和诊断
系统介绍
如何得到满意的荧光图像：
1，特异性激发：
针对荧光染料，选择特异的激发滤色片及发射滤色片，Chroma及
Semrock有各种波长的高透过率滤色片供选择
2，特异性标记：
减少非特异性结合，降低本底
3，减低光漂白：
使用高灵敏CCD，在极低的激发光强、短曝光条件下，获得高信噪比的图像。对多重荧光标记样品，
需要分别激发取像时，建议系统配置电动光闸、电动转轮，按照长波到短波的激发顺序进行实验，
以减少光漂白
4，减少非焦面荧光影响，可以采用共聚焦方式提高Z轴分辨率
- FISH（荧光原位杂交特性）：
-
特殊的颜色补偿的颜色(消除颜色的混淆)
含染色体核型（颜色／灰度）
彩色至灰度转换(用于DAPI标记的分带细微分析)
灰度图像DAPI探针标记高度精度定位
含FISH、CGH、Fibre Fish等通用测量模式
自动探针标记点计数
多色彩荧光原位杂交用几种不同颜色的荧光素单独
或混合标记的探针，进行原位杂交，同时检测间期
细胞或中期细胞中的多个特异核酸序列。其克服了
常规技术的许多局限，能同时检测多个基因，分辨
复杂的染色体易位和微小缺失，区分间期细胞多倍
体和超二倍体等 - 对于系统要求：
- * 研究级荧光显微镜
* 电动滤色镜转轮/电动光闸（可选）
* 高灵敏、高信噪比CCD
-
应用范围：
1. 临床医学
计划生育,新生婴儿遗传疾病研究,妇幼保健科学,遗传学,血液科及血液病,肿瘤细胞扫描
2. 绘制基因物理图谱
FISH能快速、精确的确定杂交或探针在染色体上的位置和探针与染色体带、端粒、着丝粒的相互关系
间期细胞染色体FISH可确定空间位置
紧密相连的探针顺序
3. 致突变研究
同时检测染色体结构和数目畸变
检测染色体复杂易位，微小损失
快速检测间期及单倍体细胞染色体断裂非整倍体和超二倍体
检测微核染色体来源进行微核分析
检测双着丝粒染色体及无着丝粒染色体等不稳定畸变
检测遗传物质损伤后的修复
4. 肿瘤病理学
直接检测肿瘤组织染色体数目和结构异常
检测癌基因、抑癌基因、病毒序列的有无及拷贝数无需对分离的肿瘤细胞进行细胞培养
5. 产前诊断
直接用孕中期羊水细胞及植入前卵裂球细胞
母体外周血分离的胎儿细胞进行分析，无需细胞培养过程，可对间期细胞直接检测分辨，而传统遗传学检测手段无法分辨的异常核型
同时检测多种类型的非整倍体发生频率
简化绒毛细胞和羊水细胞长期培养及核型分析方法