Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)
Andor荧光共振能量转移系统
Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)
荧光共振能量转移(FRET)是指两个荧光发色基团在足够靠近时，当供体分子吸收一定频率的光子后被激发到
更高的电子能态，在该电子回到基态前，通过偶极子相互作用，实现了能量向邻近的受体分子转移
系统介绍
- 示例
上图为单个RNA分子的FRET实验，受体和供体（供体发射光为绿色、受体
发射光为红色)分别标记在一个内含子的两端，这个内含子折叠剪切出外显
子时需要镁离子和一个蛋白辅助因子(CBP2)。左图由于受体和供体没有发
生折叠靠近所以几乎没有FRET发生。右图由于镁离子和CBP2的存在，
RNA剪切被激活，内含子的两端折叠将两个外显子拉近，这时受体和供体
靠的很近因此激发供体则受体发出红色发射光（发生了FRET）。
（哈佛大学化学与化学生物系庄晓薇实验室供图）
- 用于：
- 检测酶活性变化
细胞凋亡的研究
分子内结构变化(蛋白质、DNA构象等)
膜蛋白的研究（受体激活效应在细胞膜上的横向扩散/膜
蛋白的定位修饰/细胞膜受体之间相互作用）
细胞内分子之间相互作用等
- FRET实验发生条件：
- 存在荧光供体和受体(供体的发射光谱与受体的激发光谱有重叠)
供体和受体的距离足够近(1-10nm)
合适的偶极方向
足够的荧光寿命
FRET显微成像示例： 用供体的激发光激发 样品，在供体和受体 的发射波长上分别记录荧光强度，一旦CFP融合蛋白和YFP 融合蛋白之间发生相互作用或者分子的构
象发生变化，分子两端的GFP与YFP靠的足够近，供体的发射光会减弱，而受体的发射光增强
- 系统构成：
* 研究级显微镜
* 高稳定性光源
* 分频器或电动滤色镜转轮
* Andor单光子探测器(EMCCD)
Andor单光子探测器(EMCCD)极高的灵敏度和极低的读出噪声、数据采集的准确性和可重复性，
非常适合FRET 实验
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